Biondi fit un début malheureux en tant que nageur. Dans sa première course, ayant débuté dans ce sport à l’âge de cinq ans, il fit deux faux départs et perdit son maillot de bain dans le plongeon de départ. Loin d’en être intimidé, il devint l’un des grands de tous les temps après avoir remporté onze médailles olympiques dans sa carrière.
Dans le 100 m papillon aux Jeux à Séoul, Biondi était le favori. Il dut, cependant, se contenter de la deuxième place après avoir été battu de 0,01seconde par le Surinamien Anthony Nesty. Ceci l’amena à s’interroger : « pour un centième de seconde, qu’en aurait-il été si j’avais eu les ongles plus longs ?
Biondi conduisit sa déception avec succès. Il participa à cinq autres épreuves et remporta l’or dans chacune d’entre elles, établissant un record du monde dans quatre d’entre elles. Il prit part aux trois victoires américaines dans les relais et son palmarès de sept médailles en natation à une même édition de Jeux n’a été battu que par Michael Phelps.
Ce qui distingue Biondi des autres nageurs c’est son ardeur compétitive. Plus l’épreuve était importante mieux il nageait, et ses meilleurs résultats furent toujours en finale olympique. Dans le 50 m nage libre à Séoul, il battit son coéquipier Tom Jager pour la première fois en deux ans.